定慧寺位于江苏镇江市焦山南麓。焦山又名“樵山”、“狮子山”、“双峰山”、“乳玉山”，位于镇江东面的长江之中，素有“中流砥柱”之称。因东汉末年隐士焦光避居此地，故名“焦山”。山高70.7米，有东、西两峰之间又有一小峰，称“别峰”。焦山与金山隔江相望，称“姐妹山”。镇江名胜向以金焦二山著称，二山各有特色，古人曰：“金以巧胜，焦以拙胜；金为贵公子，焦似淡道人；金宜游，焦且隐；金宜月，焦宜雨。”焦山林木葱茏，满山青翠，李白站在焦山上“望松寥山”，写诗曰：“石壁望松寥，宛然在碧霄…仙人如爱我，举手来相招。”焦山最多的是绮竹苍松，翠色滴人。远远望去，如一块玉浮在江上，故焦山又称名“浮玉山”。寺庵楼阁皆掩隐于茂林修竹之中，有“焦山山裹寺”之说，与“金山寺裹山”相应。

寺创建于东汉兴平年间(194-195年)，是中国最早的一批佛教寺院之一。在佛教禅寺庙中有着显赫地位。曾有“十方丛林”、“历代祖庭”之称。

唐朝时，玄奘法师的弟子法宝在寺内创建大雄宝殿。法宝曾撰《俱舍论疏》15卷、《一乘佛性究竟论》，是玄奘门下的著名弟子。后来鉴真法师的弟子神邕也来焦山主持佛事，焦山有“十方丛林”之称。唐代后朝，枯木禅师来此重修寺庙，振兴丛林。

宋朝时改为“普济禅院”。

元代称“焦山寺”，后毁于火。

明宣德年间(1426-1435年)，在宏衍掸师的主持下，重建各殿堂，与金山寺并称模范丛林。

寺有殿宇98间、和尚3000人，参禅的僧侣达数万人，加上定慧寺两旁还有18个庵寺，称“十八房”，达到顶盛时期。

后万历年间，雪浪禅师来寺主讲《楞严》等经。清朝康熙皇帝南游焦山时，将寺庙改名为“定慧寺”，沿用至今。

“定慧”二字，取于佛家“由戒生定”，因定发慧和寂照又融，定慧均等之意。“定”，即去掉一切私心杂念，思想高度集中；“慧”，即由“闻、思、修”三条途径来增长智慧。

1934年，智光法师在定慧寺创办焦山佛学院，共开办了十几年，培养了一批佛教人才。

1946年，太虚法师又在焦山开办了中国佛教会会务人员训练班。

1949 年后，政府多次拨款修缮定慧寺。

1951年，近代高僧茗山法师（1914-2001）到焦山定慧寺任住持。

1983年，被国务院定为汉族地区全国重点寺院。